溴化氫瓊脂糖凝膠

簡要描述：CNBr activated Sepharose 4B
溴化氫瓊脂糖凝膠 4B
應(yīng)用：親和層析填料
包裝：15克

產(chǎn)品型號： 09-250

所屬分類：溴化氫瓊脂糖凝膠

更新時間：2025-04-01

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

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詳情介紹

CNBr activated Sepharose 4B

溴化氫瓊脂糖凝膠 4B

應(yīng)用：親和層析填料

包裝：15克、100克、250g 固體包裝

為確保產(chǎn)品的性能和無憂的操作，使用前請仔細(xì)閱讀本手冊，有任何疑問請咨詢本公司售后技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐匿N售人員（見附錄）。

1.產(chǎn)品介紹

CNBr Focurose 4FF是經(jīng)過溴化氰活化后含有氰酸酯基團(tuán)的快流速純化介質(zhì)，適用于偶聯(lián)蛋白質(zhì)、多肽、核酸等含有氨基的生物分子。在生物醫(yī)藥純化工藝中經(jīng)過反復(fù)的驗證，得到了廣泛的應(yīng)用。

特點如下：

a.應(yīng)用廣泛，溴化氫瓊脂糖凝膠可適用于偶聯(lián)含氨基的生物類大分子。

b.多點偶聯(lián)，簡單、靈活、快速、有效，能高效的維持生物分子的生物學(xué)活性及穩(wěn)定性。

c.流速快、產(chǎn)率高、易于放大。

表1：介質(zhì)性能參數(shù)

基質(zhì)	高度交聯(lián)4%的瓊脂糖
粒徑范圍	45-165µm
平均粒徑	90µm
結(jié)合載量	30mg(Trypsinogen)/ml(介質(zhì))
pH穩(wěn)定性	3-11（長期） 2-11（短期）
最大流速	700cm/h
操作壓力	≤0.3MPa
貯存溶液	100%丙酮
貯存溫度	4-8℃

2.偶聯(lián)條件

a.（A液）清洗

取適量的沉降膠（0.83g清洗完成后約為1.0ml），用5倍體積的A液將介質(zhì)重懸，5min后將溶液抽干。重復(fù)此步驟5次。

備注：此步驟用于激活介質(zhì)，要保證A液的清洗體積要充足、清洗時間固定在0.5h左右（時間太久介質(zhì)上面的基團(tuán)會水解）。

b.配基溶液的制備

將要偶聯(lián)的生物分子用B液溶解或者將生物分子置換到B液中（生物分子濃度為1-10mg/ml,建議為5mg/ml）。

備注：確保偶聯(lián)時的pH和鹽濃度與B液一致。

c.偶聯(lián)

將清洗完的介質(zhì)和準(zhǔn)備好的樣品按等比例（體積比）混合，室溫條件下溫和混勻3-4h。確定偶聯(lián)成功（通過測定偶聯(lián)前后生物分子含量確定偶聯(lián)效率）后，將溶液抽干。

備注：偶聯(lián)建議在室溫條件下偶聯(lián)3-4h。對于不穩(wěn)定的配基，建議4-8℃偶聯(lián)過夜。

d.（C液）清洗

用5倍體積的C液將偶聯(lián)后的介質(zhì)重懸，再將溶液抽干。再重復(fù)此步驟3次。

備注：此步驟用于清洗介質(zhì)中殘留的生物分子，清洗要*。

e.封閉

用5倍體積的C液進(jìn)行重懸，室溫條件下溫和混勻3-4小時后，將溶液抽干。

備注：此步驟用于封閉介質(zhì)上面的基團(tuán)，室溫條件下溫和混勻3-4小時即可。

f.（D液和E液）清洗

用5倍體積的D液將封閉后的介質(zhì)重懸，5min后將溶液抽干；再用5倍體積的E液將介質(zhì)重懸，5min后將溶液抽干。重復(fù)此步驟3次。

備注：此步驟用于酸堿清洗掉偶聯(lián)不夠緊密的生物分子。

g.保存

用5倍體積的純化水將介質(zhì)重懸后抽干，再用5倍體積的20%乙醇將介質(zhì)重懸后抽干，最后用20%乙醇浸泡保存。

備注：此步驟用于保存介質(zhì)，避免微生物生長。

h.溶液配制

A液：0.001MHCl、0.5M NaCl，調(diào)節(jié)pH 3.0，4-8℃保存（A液使用前要進(jìn)行預(yù)冷處理）。

B液：0.2M NaHCO3、0.5 M NaCl，調(diào)節(jié)pH 8.3（如果要偶聯(lián)的生物分子為IgG時，pH=8.5-9.0），室溫保存。

C液：0.1M Tris-HCl，調(diào)節(jié)pH 8.3，室溫保存。

D液：0.05M Tris-HCl、0.5M NaCl，調(diào)節(jié)pH 8.5，室溫保存。

E液：O.05M GAN氨酸、0.5MNaCl，調(diào)節(jié)pH 3.5，室溫保存。

F液：1.0M NaCl，室溫保存。

3.清洗

清洗后可以去除一些強(qiáng)結(jié)合性物質(zhì)（例如一些強(qiáng)結(jié)合的蛋白、變性蛋白、脂類等），從而達(dá)到恢復(fù)介質(zhì)的優(yōu)良性能（例如載量、流動性、柱效等）。

建議每使用5次后進(jìn)行一次清洗，具體清洗頻率需根據(jù)純化的初始樣品的潔凈度進(jìn)行調(diào)整。

⑴常規(guī)清洗

a.用5-10倍柱體積的純化水沖洗。

b.用5-10倍柱體積的D液沖洗。

c.用5-10倍柱體積的E液沖洗。

d.用5-10倍柱體積的F液沖洗。

e.用5-10倍柱體積的純化水沖洗。

f.用5-10倍柱體積的20%乙醇沖洗后保存。

⑵劇烈清洗

a.用2-5倍柱體積0.2%非離子型去污劑沖洗后，立即用5-10倍柱體積純化水沖洗。

b.用2-5倍柱體積6M鹽酸胍沖洗后，立即用5-10倍柱體積純化水沖洗。

c.用5-10倍柱體積的20%乙醇沖洗后保存。

備注：劇烈清洗條件是否適用主要取決于偶聯(lián)的生物分子的穩(wěn)定性，采用此條件清洗前，建議先做一個小規(guī)模的預(yù)實驗驗證生物分子的穩(wěn)定性。

4.應(yīng)用案例

案例一

案例二

5.常見問題

表2：常見問題及解決方案

問題	可能原因	解決方案
偶聯(lián)效率較低	1.B液鹽濃度或pH不對	檢測B液配制是否正確
	2.偶聯(lián)時間不夠	延長偶聯(lián)時間
	3.預(yù)活化填料不合適	嘗試其它種類的預(yù)活化填料
純化時目標(biāo)物不與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較低	1.上樣量過載	降低上樣量
	2.上樣速度過快	降低上樣流速
	3.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集	及時有效地清洗介質(zhì)
	4.樣品在儲存或上樣過程中失活	正確儲存待純化樣品以維持樣品的活性
	5.配基和目標(biāo)物結(jié)合比例比較低	嘗試加大偶聯(lián)時配基濃度
	6.配基在偶聯(lián)或清洗過程中降解	檢測配基在偶聯(lián)或清洗中的穩(wěn)定性
洗脫時沒有收集到目標(biāo)物或只收集到少量目標(biāo)物	1.目標(biāo)物沒有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少	降低上樣流速并檢查介質(zhì)的結(jié)合能力
	2.洗脫條件不合適	更改相應(yīng)洗脫條件或增強(qiáng)洗脫液的洗脫能力
	3.目標(biāo)物在洗脫液條件下出現(xiàn)聚集沉淀	檢測目標(biāo)物在洗脫液條件（鹽濃度和pH等）下的穩(wěn)定性
目標(biāo)物純度較低	1.樣品沒有經(jīng)過前處理	樣品上柱前必須要經(jīng)過離心或過濾
	2.樣品粘度過高	用平衡液適當(dāng)?shù)南♂寴悠罚档驼扯取?/span>
	3.洗雜不*	加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致
	4.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集沉淀	及時有效地清洗介質(zhì)
	5.洗脫條件不佳，洗脫速度太快、梯度太陡。	調(diào)整洗脫條件
	6.目標(biāo)物出現(xiàn)降解	檢測目標(biāo)物的穩(wěn)定性
	7.柱料裝填效果不佳	重新裝填或購買
	8.雜質(zhì)出現(xiàn)非特異性吸附	適當(dāng)選擇添加劑降低非特異性吸附
	9.分離柱頂部有較大儲樣體積	重新裝柱或降低儲樣體積
	10.介質(zhì)中有微生物生長	介質(zhì)使用完后，請及時正確保存介質(zhì)
介質(zhì)載量下降	1.上樣速度過快	降低上樣流速
	2.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集，導(dǎo)致載量下降。	及時清洗介質(zhì)
	3.使用次數(shù)過多，配基出現(xiàn)脫落	重新偶聯(lián)新的介質(zhì)
	4.樣品在儲存或上樣過程中失活，不能較好的與配基結(jié)合	正確儲存待純化樣品以維持樣品的活性
色譜峰上升緩慢	介質(zhì)裝填過緊	重新裝柱
色譜峰拖尾	介質(zhì)裝填太松	重新裝柱
柱床有裂縫或干涸	出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入	檢查管路是否有泄露或氣泡，重新裝柱
液流較慢	1.蛋白或脂類聚集	及時清洗介質(zhì)或濾膜
	2.蛋白沉淀在介質(zhì)中	調(diào)整平衡液和洗脫液組分，以維持目標(biāo)物的穩(wěn)定性和介質(zhì)的結(jié)合效率
	3.分離柱中微生物生長	所用試劑必須經(jīng)過過濾和脫氣；樣品上柱前必須離心或過濾