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黃曲霉毒素免疫親合柱反應(yīng)原理及樣品提取說明

發(fā)布時(shí)間: 2022-01-19  點(diǎn)擊次數(shù): 4009次
  黃曲霉毒素免疫親合柱產(chǎn)品概述:
 
  黃曲霉毒素是一類真菌(如黃曲霉和寄生曲霉)的有毒性的代謝產(chǎn)物,是一種毒性*的物質(zhì),具有很強(qiáng)的致癌性。黃曲霉毒素的危害性在于對(duì)人及動(dòng)物肝臟組織的破壞作用,嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中以黃曲霉毒素B1為多見,其毒性和致癌性也是*的。在玉米、花生、小麥、棉花種子和一些干果中常能檢測(cè)到黃曲霉毒素B1。
 
  反應(yīng)原理:
 
  黃曲霉毒素免疫親合柱測(cè)定的原理是抗原抗體反應(yīng)。黃曲霉毒素B1單克隆抗體固定于柱內(nèi)凝膠上,樣品中的黃曲霉毒素B1經(jīng)過提取、過濾、稀釋,然后緩慢通過黃曲霉毒素B1免疫親和柱,在柱內(nèi)黃曲霉毒素B1與抗體特異性結(jié)合,之后洗滌免疫親和柱,除去未結(jié)合的其他物質(zhì)。用甲醇洗脫黃曲霉毒素B1,注入到分析儀器中進(jìn)行檢測(cè)。
 
  黃曲霉毒素免疫親合柱檢測(cè)樣品提取及稀釋:
 
  大米、玉米、小麥、堅(jiān)果、調(diào)料、花生及其制品:準(zhǔn)確稱取試樣25.0g于250mL具塞錐形瓶中,加入5.0g氯化鈉及準(zhǔn)確加入125.0mL甲醇-水(7+3),以均質(zhì)器高速攪拌提取2min。槽紋濾紙過濾,準(zhǔn)確移取15.0mL濾液并加入30.0mL水稀釋,用玻璃纖維濾紙過濾,至濾液澄清,備用。
 
  植物油脂:準(zhǔn)確稱取試樣25.0g于250mL具塞錐形瓶中,加入5.0g氯化鈉及入125.0mL甲醇-水(7+3),以均質(zhì)器高速攪拌提取2min。槽紋濾紙過濾,準(zhǔn)確移取15.0mL濾液并加入30.0mL水稀釋,用玻璃纖維濾紙過濾,至濾液澄清,備用。
 
  醬油:稱取試樣50.0g于250.0mL具塞錐形瓶中,加入2.5g氯化鈉及加入甲醇-水(8+2)至100.0mL,以均質(zhì)器高速攪拌提取1min。槽紋濾紙過濾,準(zhǔn)確移取10.0mL濾液并加入40.0mL水稀釋,用玻璃纖維濾紙過濾,至濾液澄清,備用。
 
  食醋:準(zhǔn)確稱取5.0g樣品,加入1.0g氯化鈉,以pH7.0磷酸鹽緩沖溶液稀釋至25.0mL,混勻,定量濾紙過濾。取10.0mL濾液加入10.0mL pH7.0磷酸鹽緩沖溶液,混勻。以玻璃纖維濾紙過濾,至濾液澄清,備用。
 
  飼料:準(zhǔn)確稱取試樣50.0g于250mL具塞錐形瓶中,加入5.0g氯化鈉及入100.0mL甲醇-水(8+2),以均質(zhì)器高速攪拌提取2min。槽紋濾紙過濾,準(zhǔn)確移取10.0mL濾液并加入40.0mL pH7.0 PBS稀釋,用玻璃纖維濾紙過濾,至濾液澄清,備用。
 
  樣品的凈化
 
  黃曲霉毒素免疫親合柱的柱容量(最大吸附黃曲霉毒素量)為300ng,當(dāng)樣品中黃曲霉毒素超過測(cè)定范圍時(shí),請(qǐng)適當(dāng)減小上柱體積,使其在檢測(cè)范圍內(nèi),計(jì)算出準(zhǔn)確含量。
 
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